多肽合成

1.经典的多肽固相合成法

多肽固相合成法通过将氨基酸固定在固相载体上，实现多肽链的逐步合成固相载体通常为高分子树脂，如聚苯乙烯-苯二乙烯交联树脂、聚丙烯酰胺聚乙烯-乙二醇类树脂及行生物等。这些树脂需要导入反应基团，才能与氨基酸形成共价键。

2.投料与树脂处理:

将树脂加入固相合成仪中，用适当的溶剂(如DCM)溶胀树脂然后抽干。使用DMF等溶剂洗涤树脂，以去除杂质洗涤结束后抽干备用

3.缩合反应:

将第一个氨基酸(通常从C端开始)用一定体积的DMF溶解，并加入缩合剂(如DCC、HBTU等)进行活化。将活化后的氨基酸溶液投入固相合成仪中补充DMF至适当反应浓度，搅拌进行缩合反应。

4.脱除保护墓:

使用Kaiser试剂等检测反应程度，当反应结束后抽干溶剂。

用DMF洗涤树脂，然后加入适当的碱性溶液(如PIPDMF溶液)脱除氨基酸N端的保护基(如Fmoc基团)再次使用Kaiser试剂检测脱保护反应程度，反应完毕后抽干溶剂并用DMF洗涤，准备加入下一个氨基酸。

5.缩合循环:

按照树脂上预设的氨基酸序列，依次重复上述“脱保护→洗涤→活化氨基酸→投料→缩合-洗涤”的步骤，进行缩合循环操作，直至完成所有氨基酸的连接，

出料与树腊干燥:

合成结束后，用适当的溶剂(如IPA和DCM)交叉洗涤树脂，完成树脂的收缩。将树脂出料至不锈钢托盘等容器中。

在真空干燥箱中室温于燥树脂，干燥完毕后称重并计算收率。

6.树脂裂解与多肽纯化

树脂裂解:配置裂解液(通常包含TFA等强酸)并提前置冰柜中冷藏保存，将肽树脂加入反应釜中，加入预冷的裂解液，搅拌反应以将多肽从树脂上裂解下来。裂解结束后放出反应液，抽滤除去树脂并以TFA等溶剂洗涤。

多肽纯化:将裂解液转入旋转蒸发仪中室温浓缩至小体积。使用适当的沉淀剂(如甲基叔丁基醚)使多肽析出，并通过离心、洗涤等步骤得到粗肽。使用高效液相色谱(HPLC)等方法对粗肽进行纯化，以去除杂质并分离出目标多肽。

7.树脂裂解与多肽纯化

浓缩、过滤与冻干:将纯化后的多肽溶液旋蒸除去有机溶剂，得到浓缩的多肽溶液。对浓缩后的多肽溶液进行无菌过滤。将过滤后的多肽溶液置于冻干机中，设定适当的升温程序进行冻干处理。冻干结束后取出多肽产品，进行包装、入库等后续操作。

写到最后:

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