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多肽合成中二硫键成环的条件抉择及成环思路
作者:固拓多肽合成公司    发布于:2022年09月05日
摘要:一、二硫键反应条件选取二硫键就是指蛋白质或多肽分子结构中两个不同位点Cys的巯基(-SH)被氧化所产生的S-S共价键。一条多肽链上不一样的位置的氨基酸中间所产生的二硫键,能够把多肽链折叠成特定的空间分布。多肽分子

一、二硫键反应条件选取

二硫键就是指蛋白质或多肽分子结构中两个不同位点Cys的巯基(-SH)被氧化所产生的S-S共价键。一条多肽链上不一样的位置的氨基酸中间所产生的二硫键,能够把多肽链折叠成特定的空间分布。多肽分子一般来说分子量很大,空间分布繁琐,结构中产生二硫键时需要两个半胱氨酸在空间距离上非常接近。另外,多肽结构中还原态的巯基化学特性活跃,很容易出现其它的副作用,同时肽链上其余侧链也可能会出现许多修饰,所以,多肽链采取修饰所选择的氧化剂和氧化条件是反应的重要因素,反应原理也较为复杂,既有可能是自由基反应,也有可能是离子反应。

多肽合成中二硫键成环的条件抉择及成环思路

反应条件有许多种选择,例如空气氧化,DMSO氧化等温和的氧化过程,或H2O2I2,汞盐等剧烈的反应条件。

1、空气氧化法:

空气氧化法生成二硫键是多肽合成中最具代表性的办法,一般是将巯基处在还原态的多肽溶解于水里,在近中性或弱碱性环境下(PH6.5-10),反应24个小时以上。为了降低分子相互间二硫键产生的可能性,这种方法往往需要在较低浓度的环境下完成。

2、碘氧化法:

将多肽溶解于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中,逐滴滴加10-15mol/L的碘来进行氧化,反应15-40min。当多肽链里面含有对碘特别敏感的TyrTrpMetHis的残基时,氧化条件要非常精准,氧化完成后,立即加入维生素C或硫代硫酸钠清除过多的碘。

二、两对及多对二硫键成环对策

当序列中含有两对或多对二硫键想要成环时,一般会有自然随机成环和定点成环两种情况:

1、自然随机成环指序列当中的Cys相互间随意成环,与一对二硫键成环条件差不多;

2、定点成环指序列当中的Cys根据设计要求产生二硫键,反应过程相对来说比较复杂。在固相合成多肽前,需提前制定几对二硫键生成的顺序和方法路经,选择适合的侧链巯基保护基,凭借其特性的差异,逐步氧化生成两对或多对二硫键。一般采用的巯基保护基有trt,Acm,Mmt,tBu,Bzl,Mob,Tmob等基团。

相对于二对及多对二硫键成环的多肽,在制定好二硫键生成次序及Cys侧链保护对策后,对于每一对二硫键成环后,都会取少部分树脂切割,并且对切割后产品实施MS检验。

 

写到最后:

杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成业务:药物肽、临床肽、订书肽、淀粉肽、醛肽、环肽、二硫键搭桥多肽、穿膜肽、各种抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶联BSAKLH抗原肽、各类酸修饰多肽、各种胺类化合物修饰多肽(苯胺、异戊胺、二乙胺)、各类荣光标记(FITCFAM系列、DOTATAMRA系列、Cy系列)同位素肽等。

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