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我们在用到多肽的时候,会碰到多肽纯度和多肽含量这两个数据,但为什么会出现多肽纯度是95%,然而多肽含量却只是80%?接下来简单介绍一下这两个截然不同的含义。
多肽含量:指的是样本中多肽类成分相对于其他非多肽类成分所占用的比例;
多肽纯度:指的是采用HPLC分析方法在肽链的吸收波长214nm处检测出来的目标多肽的含量;
HPLC不仅能够检测目标多肽,还能够检测出缺损序列(缺失了一种或多种氨基酸残基的靶序列),截断序列(加保护时产生的序列)和脱保护不完整序列(源自于整体合成环节或最终的裂解过程)等杂物;不过,HPLC检测不出水与残余的盐份如三氟乙酸盐,醋酸盐等,并且在多肽合成过程当中,多肽是依靠三氟乙酸将肽序从树脂上切割下来的,因此在提纯环节中会带来少许的TFA,所以,多肽游离的氨基尾端和其它侧链如Arg、Lys、His都能够形成少许TFA杂质;再有就是水分,多肽一般使用冻干法脱水,即便是这样,水也可能因为共价结合的能力不一样而不同程度地存在着,所以说,一般签约的多肽中,往往都带有TFA盐和少量的水分,而这都是HPLC检测不出来的,所以,造成了多肽含量和肽纯度的差异。
多肽纯度需要用HPLC分析方法检测得出的,多肽含量是由氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。这个信息通常是在那些对肽的浓度非常敏感的研究中,对计算多肽的浓度值是十分重要的。
写到最后:
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