多肽合成

1.酰基叠氮法

酰基叠氮法早在1902年就被引入肽化学。因此，这种方法是最古老的冷凝方法之一。在缩肽反应过程中，氨基酸很少用叠氮法外消旋，因此这种方法被肽合成工作者广泛采用。最近，中国学者李清庚用这种方法成功合成了一系列谷氨酰胺类抗肿瘤化合物。叠氮肽接枝分为三步。首先是羧基部分被甲酯、乙酯、苄酯等保护的肽。在室温下进行酰肼水解，然后酰肼与亚硝酸盐在低温(低于-15℃)和酸性条件下反应生成叠氮化物，最后用有机碱调节酸碱度至8-9，加入氨基组分完成肽接枝反应。机理如下。

此外，还发现了一种磷酸盐缩合试剂DPPA，它可以不经肼解直接由羧基变成叠氮化物。与传统的叠氮法相比，它不需要酰肼中间体，简化了反应步骤，反应条件更温和，因此受到人们的欢迎。机理如下。

2.混合酸酐法

该方法是指将被保护氨基酸的羧基制备成高活性混合酸酐，然后与氨基缩合生成肽的方法。混合酸酐法是20世纪50年代初发展起来的。二苯基磷酸是制备混合酸酐的主要试剂，苯甲酸次之。现在广泛使用氯甲酸烷基酯，主要是氯甲酸乙酯、氯甲酸异丁酯和氯甲酸异丙酯。混合酸酐法具有反应速度快、产品纯度高、收率高、经济性好等优点，因此深受当今制药工作者的喜爱。南京农业大学的米鹏程等人于2007年成功合成了胸腺五肽(TP5)的中间体Fmoc-Tyr(t-Bu)-WangResin。在反应过程中，羧基组分与氯甲酸异丁酯在低温(-15℃)下反应生成混合酸酐，然后在叔胺存在下，在碱性条件下与氨基组分反应生成肽。机理如下。

3.碳化二亚胺法

在碳二亚胺法的发展过程中，二环己基碳二亚胺(DCC)首先被用于肽的合成并得到广泛应用。DCC相对便宜，可溶于常用的肽合成试剂。然而，当使用DCC作为缩合剂时，DCC产生的DCU在水和有机溶剂中具有一定的溶解度，使得在产品纯化过程中难以消除。因此，人们开发了水溶性碳二亚胺EDC来代替DCC，只需要用酸或水洗涤就可以去除反应后产生的尿素，有效地解决了这个问题。刘国渡等也用此方法合成了活性三肽囊素。碳二亚胺的缩合试剂机理如下。缩合试剂与羧基成分反应形成活性中间体，然后与氨基成分在碱性条件下反应完成肽链生长反应。

4.酰卤法

这种方法类似于有机化学，用酰氯活化羧基，然后在室温或低温下形成酰胺是常用的方法。但是这种方法只用于试剂应用中Fmoc保护的氨基酸，因为Fmoc在酸性条件下非常稳定，而被其他保护基团保护的氨基酸很少用这种方法合成，因为大多数学者认为酰氯法“活性过强”，容易发生外消旋等很多副反应。

5.苯并三唑型(防喷器系列)

可以说BOP是第一代苯并三唑缩合试剂，是缩合试剂的一次革命，因为它的肽接枝效率比DCC高很多，消旋化的风险明显降低。后来，人们发现了同类型的缩合试剂HBTU、ByBOP、TBTU等。共同点是缩合试剂在有机碱存在下与羧基成分反应生成羧酸的苯并三唑酯活性中间体，再与氨基成分反应生成目标多肽，如下图所示。

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