定制合成 Custom synthesis
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本文章介绍固相多肽合成最常规的流程,专业性偏简单,作为参照。
一、树脂溶胀
称重取代度为1.0mmol/g的0.6gCTCResin,将树脂放进反应管内,加DCM(大概15ml/g),震荡30min。假如采用的时其他树脂,一般 会提早将第一个氨基酸与树脂联接好,如Fmoc-Leu-WangResin,溶胀后立即开展第三部脱保护操作。
二、缩合第一个氨基酸
通过沙芯旋蒸掉溶剂,加入3倍摩尔过多的Fmoc-Leu-OH,加入小量DMF融解,再加入6倍摩尔量的DIPEA,最终加入2.85倍摩尔量缩合实验试剂HBTU,鼓N20.5h。应用DMF洗涤3-4次,去小量树脂(大概20多个树脂即可)开展茚三酮检验,为无色。
(照片源于一所高校实验室)
三、脱保护
加15ml20%哌啶/DMF溶液(15ml/g),5min,除掉再加15ml20%哌啶DMF溶液(15ml/g),15min。应用DMF洗涤5次,去小量树脂(大概20多个树脂即可)开展茚三酮检验,为蓝色(或别的颜色)。
四、以此类推重复第二和第三流程,最终用乙醇洗树脂3次,并排干。最后获得流沙状的树脂肽,比如:H2N-Gly-Arg(Pbf)-His(Trt)-Ile-Leu-CTCResin。
五、切割
具体操作见多肽切割一文,现有很详解。
六、补充:
一般采用茚三酮检验,加热溫度为110℃上下,加热時间为3min。其溶液配制也是有很多种多样,实验者能够多试着一下。
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