多肽合成

      3-胰细肤水样胰蛋白酶(3C-likeProteinase，3CLPro)是新式新冠病毒的关键的胰蛋白酶，另外也是病毒感染非结构蛋白Nsp5。3CLPro能够 水解反应病毒感染活性多肽为多功能性蛋白质，针对病毒性感染与拷贝有关键功效，是开发设计抑止抗病毒的药的关键靶标。

      高品质的3CLPro蛋白质是目的性药物研发和评定的重要。下列是3CLPro酶活检验方式，15min进行检验，可用以3CLPro以及缓聚剂的评定。

3CLPro

技术指标：

      检验基本原理：

      荧光基团EDANS和猝灭官能团DABCYL均被联接到3CLPro胰蛋白酶的纯天然底物上，当该底物未被断开时，DABCYL可猝灭EDANS莹光，进而检验不上莹光；当该底物被3CLPro胰蛋白酶断开时，EDANS莹光已不被DABCYL猝灭，随后可检验到EDANS莹光。胰蛋白酶缓聚剂的实效性也可凭着EDANS莹光抗压强度的转变开展检测。

      检验方式

      提前准备原材料：

Assaybuffer：50mMTris-HCl,pH7.0

2019-nCoV3C-likeProteinase（3CLPro，NovoproteinCat#CR76）

3MMDabcyl-KTSAVLQSGFRKME-Edans

      检验流程：

1.配置90μl反映管理体系：50mMTris-HCl,60μMDabcyl-KTSAVLQSGFRKME-Edans，pH7.0，37℃孵育5min；

2.添加酶液10μl，搅拌，用340nm光波长激起，535nm光波长测量10min内吸光度值的转变，每一分钟载入一次标值，测算每分OD值转变值ΔODtest（以10μlAssaybuffer替代酶液设成空白试验，记为ΔODblank）。

3. 绘制标准曲线：

4. 计算3CLPro的比活（pmol/min/mg）

Vs：样品体积 (0.01ml)

Df：稀释倍数

2.204092：标准曲线斜率

C：酶浓度 (mg/ml)

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