多肽合成

在剖析蛋白质的结构和作用时，最重要的是怎样得到高纯的蛋白。现如今最常见的方式便是亲和力标签系统，早已成为重组蛋白检测和提纯中一个必不可少的专用工具。不但如此，它还很有可能对总体目标蛋白的理化性质造成有益的影响，乃至可以提升重组蛋白的生产量。亲和力标签有各种不同的分类方法。依据含量的尺寸，可分成“小分子短肽标签”和“蛋白质标签”两类。固拓小编特意为大家撰写了“详说小分子短肽标签”系列文章，希望可以协助大家从诸多蛋白标签中挑选适合自身研究课题的。

目前除开His-tag以外另一个应用很普遍的亲和力标签-FLAG-tag。FLAG-tag被广泛运用于各种表达系统中,比如大肠杆菌，酵母菌和哺乳动物细胞。FLAG-tag由八个氨基酸残基构成，编码序列是Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys（D-Y-K-D-D-D-D-K）。因为它的含量不大，只有1.01kDa，因此 不容易遮住融合蛋白中别的的蛋白表位和结构域，更不易更改融合蛋白的作用、代谢或是运送。

标签编码序列中四个连到的天冬氨酸让全部标签具有纯天然的亲水特点（hydrophilicity）。这样一来，它就非常容易定位在融合蛋白的表层，便于运用抗原来检测。特别注意的是，芬芳环在抗原-抗原结合中具有非常大的功效，因此 这一标签的第二位残基刻意设计的是酪氨酸（tyrosine）。由于FLAG-tag自身就具有免疫原形，因此 它有３个特异性的单抗，分别是M1单抗，M2单抗，M5单抗。这就促使融合蛋白检测和纯化都变得很便捷。可是试验说明FLAG-tag和特异性的抗原结合力沒有His-tag和Ni2+-NTA或是别的一些亲和力标签和检测系统的结合力那么牢固，融合蛋白的纯度只有做到90%上下(Terpe,2003)。但是没事儿，大家还能够把三个FLAG-tag设计在一起（DYKDHDG-DYKDHDI-DYKDDDDK），提升和抗原的结合以及检测的敏感度。试验证实，3FLAG乃至能检测到飞量级的融合蛋白，比别的一切系统约高于20到200倍，尤其适合于哺乳动物细胞表达系统低中表达水准蛋白质的检测。

与此同时，FLAG-tag含有一个肠激酶（enterokinase）的切割位点（D-D-D-D-K-X1）。实验证明X1这个氨基酸残基是影响肠激酶的切割效率的。恰巧赖氨酸（Lysine）在X1的位置时，切割效率达到了85%，仅次于丙氨酸 （alanine）和甲硫氨酸 （methionine）(Einhauer & Jungbauer, 2001)。通常情况下，FLAG-tag被放置在N端，通过肠激酶切掉后，就会还原融合蛋白的原始序列和结构。

写到最后：

Flag-tag多肽用作有机和医药中间体。固拓生物科技有限公司为一家专业生产多肽合成、多肽定制的生产厂家，也有供应Flag-tag多肽原材料，欢迎需要购买原料药的公司前来购买。

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